CY3-PEI 是花菁 3荧光染料共价修饰聚乙烯亚胺(PEI)得到的阳离子荧光高分子试剂,外观一般为橙红色固体粉末,水溶性良好。PEI 是经典阳离子高分子载体,CY3 赋予橙红色荧光,专门用于基因递送体系的可视化示踪,是转染相关研究里的主流标记探针。
· PEI 分为支链型与线性两种结构,支链 PEI 伯胺、仲胺、叔胺丰富,质子缓冲能力更强;线性 PEI 结构规整,细胞毒性相对更低;
· CY3 染料通过活性酯基团和 PEI 上氨基共价连接,激发波长 550 nm,发射 570 nm,橙红色荧光,和 DAPI、FITC 通道不容易重叠,适合多色共定位;
· 整体为带正电高分子,在水溶液中自发和核酸组装形成纳米复合物(polyplex)。
PEI 依靠高密度胺基,在胞内酸性囊泡中发生质子海绵效应,帮助复合物逃离溶酶体,释放核酸,这也是 PEI 作为基因载体的核心优势。CY3 标记的意义,是在不明显干扰 PEI 复合核酸、内体逃逸功能的前提下,给载体打上荧光标签。 实验中可以直接追踪 PEI / 核酸复合物:看复合物什么时候被细胞吞入、在细胞质还是细胞核富集、和溶酶体是否共定位,用来判断载体递送的瓶颈环节,优化 N/P 比例、转染条件。
1. 体外基因转染示踪:siRNA、质粒 DNA、mRNA 递送体系的细胞摄取与胞内定位;
2. 载体配方优化:对比不同分子量 PEI、不同 N/P 比例下复合物的细胞摄入差异;
3. 共定位成像:和溶酶体、线粒体标记染料搭配,研究载体胞内转运通路;
4. 纳米载体理化表征辅助:流式细胞术定量检测细胞摄取量。
· 分子量区分:1.8k PEI 毒性低但转染能力偏弱;25k 支链 PEI 转染效率更高,毒性相对偏高,按需选择;
· 标记度:标记比例过高会屏蔽部分氨基,降低 PEI 结合核酸的能力,优先选择低取代度产品;
· 实验注意:CY3 存在一定光漂白,长时间成像时适当降低激光功率;复合物现配现用,避免长时间放置团聚。
【申明】本文仅作科学研究科普,任何情况下均不得用于人体实验、临床诊断、临床治疗及其他非科研活动。