BHQ3-NHS/黑洞猝灭剂3-活性酯/BHQ3-N-羟基琥珀酰亚胺

在分子生物学与生物化学研究中，荧光标记技术因其高灵敏度和实时监测能力成为不可或缺的工具。BHQ3-NHS（黑洞猝灭剂3-活性酯）作为一种非荧光发色团，CAS号为871240-94-7。凭借其独特的猝灭性能与化学修饰特性，在荧光探针构建中展现出不可替代的价值。

结构特性与猝灭机制

BHQ3-NHS由两部分构成：BHQ3猝灭基团与NHS（N-羟基琥珀酰亚胺）活性酯基团。BHQ3基团通过吸收荧光团的激发态能量，以非辐射形式耗散能量，从而有效抑制背景荧光信号，提升检测信噪比。其吸收光谱覆盖620-730 nm范围，可与多种长波长荧光染料（如Quasar670、Cy5）形成高效FRET（荧光共振能量转移）体系。NHS酯基团则赋予其与生物分子共价结合的能力，可特异性标记含伯氨基的分子（如蛋白质、核酸的氨基修饰位点），实现探针的定向偶联。

在寡核苷酸探针设计中，BHQ3-NHS常被用于标记实时PCR双标记探针的3'端。通过与5'端荧光报告基团（如FAM、HEX）配对，形成“荧光-猝灭剂”对，实现扩增产物的实时监测。相较于传统染料，BHQ3的猝灭效率更高，可显著降低非特异性扩增信号，提升检测特异性。此外，其化学稳定性允许探针在复杂生物环境中长期保持活性，减少假阳性结果。

在蛋白质动态追踪中，BHQ3-NHS可通过标记抗体或配体分子，结合荧光成像技术，实时监测蛋白质在细胞内的定位、迁移及相互作用。其非荧光特性避免了自身信号干扰，确保观测结果的准确性。

BHQ3-NHS为深紫色粉末，需在-20℃下避光保存，避免反复冻融导致活性下降。溶解时建议使用无水DMSO或DMF，随后用缓冲液稀释至工作浓度。标记反应需在弱碱性条件（pH 7.5-8.5）下进行，以确保NHS酯基团与氨基的高效偶联。反应完成后，需通过纯化步骤去除未结合的猝灭剂，避免对下游实验产生干扰。推荐供货厂商：广州为华生物科技。

随着单分子检测与超分辨成像技术的发展，对荧光探针的灵敏度和稳定性提出更高要求。BHQ3-NHS凭借其优异的猝灭性能与化学修饰灵活性，有望在活细胞动态成像、高通量测序等领域发挥更大作用。通过结构优化（如引入光稳定性增强基团），其应用范围将进一步拓展，为生命科学基础研究提供更强有力的工具支持。